PEMERIKSAAN SEROLOGI

a.       Definisi

Pemeriksaan serologi mempunyai hasil yang sangat bervariasi tergantung pada respon imun saat pemeriksaan laboratorium dilakukan dan lamanya kelainan yang dialami penderita.

Suatu ilmu yang mempelajari cara mendeteksi suatu infeksi di dalam serum pasien, misalnya adanya antibodi (Ab) spesifik terhadap mikroba tertentu.

Pemeriksaan serologi adalah pemeriksaan yang menggunakan serum seperti pemeriksaan pada dugaan demam dengue. Demam dengue dapat merupakan infeksi pertama kali yang disebut infeksi primer dan dikenal sebagai demam dengue, serta infeksi kedua kali yang disebut infeksi sekunder yang dapat menimbulkan penyakit demam berdarah yang dikenal sebagai Dengue Haemorragic Fever (DHF). Penyakit ini dapat berlanjut dengan renjatan dan berakhir dengan kematian. Pada demam dengue, pemeriksaan serologi yang tersedia adalah pemeriksaan antigen NS-1, antibodi dengue IgG dan IgM.Uji serologi didasarkan atas ikatan spesifik antara antigen (Ag) dan antibodi (Ab). Ag yang telah diketahui akan bereaksi/berikatan dengan Ab yang belum diketahui di dalam serum. Sebaliknya Ab yang telah diketahui dapat digunakan untuk mendeteksi Ag dalam serum pasien . Reaksi Ag-Ab dapat diamati atas terbentuknya presipitasi, aglutinasi atau dengan bantuan label tertentu, misalnya label radioaktif, label enzims dll

b.      Jenis pemerikssaan

1.                           Pemeriksaan HBsAg

a)  Metode rapid test

·         Deskripsi

HBsAg adalah penanda awal infeksi Hepatitis B. Bila HBsAg menetap dalam darah > 6 bulan, berarti telah terjadi infeksi kronis.

·         Prinsip

HBsAg  dalam sampel akan berikatan dengan anti HBs colloidal gold konjugat membentuk komplek yang akan bergerak melalui membran area tes yang telah dilapisi oleh anti HBs. Kemudian terjadi reaksi membentuk garis berwarna merah muda keunguan yang menunjukkan hasil positif.  

·         Alat dan Bahan

Alat           :

-       KIT AKON ® HbsAg

-       Mikropipet 100 µL

-       Pipet Tetes

-       Tabung Reaksi

 Bahan        :

-       Sampel (Serum)

·     Prosedur Pemeriksaan        :

1)    Disiapkan rapid test, simpan pada permukaan mendatar

2)    Tambahkan 3 tetes atau 100 µL serum pada well sampel

3)    Ditunggu reaksi yang terjadi, hasil baca tidak lebih dari 20 menit.

·     Interpretasi Hasil

Positif        : Jika terdapat garis pada bagian control dan tes

Negatif       : Jika terdapat garis pada bagian control saja.

b)      Metode MEIA

·         Manfaat :

(1) Mendeteksi dan mendiagnosis infeksi Hepatitis B;

(2) Uji skrining donor darah dan pra-vaksinasi Hepatitis B; dan

(3) Memantau viral clearance.

·         Persyaratan & Jenis Sampel

Serum, Plasma (Na heparin, Na sitrat atau EDTA)

·         Stabilitas Sampel

2-8 °C : 5 hari, -10 °C atau lebih dingin : > 5 hari (dibekukan)

·         Catatan

Semua sampel yang akan diperiksa disentrifuge dengan kecepatan 10.000 rpm selama 10 menit. Hindari beku ulang, dan jangan menggunakan sampel yang diinaktifasi dengan pemanasan.

2.      Pemeriksaan VDRL

a.       Tujuan Pemeriksaan

Untuk mendeteksi adanya antibody non-treponema (Reagin)

b.       Prinsip pemeriksaan

1)      Pada penderita sifilis akan terbentuk antibody yang terjadi sebagai reaksi terhadap bahan-bahan yang dilepaskan karena kerusakan sel-sel antibody tersebut disebut regain

2)      Regain dalam serum penderita akan berflokulasi bila ditambahkan kardiolipin yaitu antigen yang berasal dari ekstraksi hati sapi.

c.        Alat dan Bahan Pemeriksaan

1)      Alat:

-          Objek glass

-          Mikropipet 10 µl, 20 µl, 40 µl

-          Pipet ukur 10 ml

-          Mikroskop

-          Penangas air

2)      Bahan:

-          Serum darah dan cairan otak

-          Antigen VDRL

-          Larutan garam buffer

-          Larutan garam fisiologis (0,9%)

d.      Metode

-          Slide

e.       Prosedur pemeriksaan VDRL pada serum

Persiapan sampel

·         Serum yang jernih dipanaskan dulu dalam penangas air pada suhu 56 °C selama 30 menit, jangan memakai serum yang keruh atau hemolisis.

·         Pemanasan serum perlu diulang pada 56 °C selama 10 menit bila pemeriksaan dilakukan lebih dari 4 jam setelah pemanasan yang pertama.

·         Pemeriksaan dilakukan bila suhu serum sudah sama dengan suhu kamar (23-29 °C).

Reagen

·         Antigen harus tidak berwarna merupakan larutan dalam alcohol yang mengandung 0,03% kardiolipin, 0,9% kolesterol dan leucithin murni (0,21%). Antigen harus disimpan dalam ruangan gelap pada suhu 6-8 °C. bilamana terjadi presipitat, maka larutan antigen tersebut tidak dapat dipergunakan lagi dan harus dibuang. Suspense antigen baru harus dibandingkan terlebih dahulu terhadap larutan antigen yang reaktivitasnya sudah diketahui sebelum dipergunakan dalam pemeriksaan rutin.

·         Larutan garam buffer VDRL dengan pH 6,0+0,1 terdapat komersial atau dapat dibuat dengan komposisi sebagai berikut:

Formaldehyde netral :  0,5 ml

·         Na2HPO4                        :  0,037 gr

·         KH2PH2PO4                   :  0,170 gr

·         NaCl                                  :  10.0 gr

·         Aquadest ad                  :  1000 ml

·         Larutan garam fisiologis (0,9 % NaCl)

Persiapan Suspensi Antigen

·         Terlebih dahulu simpan botol antigen dan larutan garam buffer VDRL pada suhu kamar selama 15 menit.

·         Pipet 400 µl larutan garam buffer, masukkan kedalam botol reagen ukuran 30 ml. kemudian ditambahkan 500 µl antigen tetes demi tetes langsung diatas larutan garam buffer sambil menggerakkan botol tersebut dengan gerakan memutar pada bidang yang rata.

·         Lanjutkan gerakan memutar botol selama 10 detik.

·          Tambahkan 4100 µl larutan garam buffer. Kocok 30 kali dalam 10 detik.

·         Suspense antigen siap untuk dipakai dan hanya tahan selama 1 hari.

Prosedur pemeriksaan kualitatif

·         Simpan semua alat pemeriksaan, serum dan suspense antigen pada suhu kamar (23°C – 29°C).pemeriksaan yang dilakukan di bawah suhu kamar memberikan reaktivitas yang lebih rendah, sebaliknya bila di atas suhu kamar reaktivitasnya meningkat.

·         Pipet 50 µl serum yang sudah dipanaskan ke atas permukaan slide

·         Pipet 50 µl suspense antigen dan teteskan diatas setiap tetes serum dengan posisi vertical.

·         Slide disimpan di atas rotator dan rotator dihidupkan selama 4 menit. Bila pemeriksaan dilakukan pada udara yang kering dan panas. Sebaiknya slide disimpan di dalam kotak yang berisi tissue/kapas basah untuk menghindari adanya penguapan yang berlebihan.

·         Pembacaan dilakukan segera setelah rotator berhenti dengan menggunakan mikroskop pembessaran 100x.

Pembacaan Hasil

Laporan hasil cukup dengan menyebutkan non-reaktif, reaktif lemah atau reaktif

·         REAKTIF                         : Bila tampak gumpalan sedang atau besar

·         REAKTIF LEMAH         : Bila tampak gumpalan kecil-kecil

·         NON REAKTIF               : Bila tidak tampak flokulasi/gumpalan.

Prosedur pemeriksaan kuantitatif

-          Letakkan serum sampel pada baris terdepan rak dan baris kedua berisi tabung dengan 700 µl larutan garam fisiologis

-          Buat pengenceran 1:8 dengan menambahkan 100 mikro serum ke dalam 0,7 ml larutan garam fisiologis.

-          Campur hingga homogen.

-          Letakkan 40 mikro. 20 mikro dan 10 mikro serum yang sudah diencerkan pada lingkaran ke 4. 5 dan 6 dari slide keramik.

-          Buang sisa serum yang sudah diencerkan tadi kedalam tabung pengenceran.

-          Dengan menggunakan pipet yang sama, letakkan 40 mikro, 20 mikro dan 10 mikro serum yang tidak diencerkan pada lingkaran pertama, kedua dan ketiga.

-          Tambahkan 20 mikro larutan garam fisiologis pada lingkaran ke 2  dan 5.

-          Tambahkan 30 mikro larutan garam fisiologis pada lingkaran ke 3 dan 6

-          Slide digoyang perlahan-lahan dengan menggunakan kedua belah tangan selama kurang lebih 15 detik untuk memperoleh campuran yang homogen.

-          Tambahkan 10 mikro suspense antigen pada tiap lingkaran.

-          Tahap selanjutnya dilakukan seperti pemeriksaan VDRL kualitatif.

-          Hasil dilaporkan dengan menyebutkan pengenceran serum tertinggi yang masih memberikan hasil reaktif.

CONTOH:

Pengenceran serum	Laporan hasil	hasil
1:1	Reaktif (+)	Reaktif pada pengenceran
1:2	Reaktif	1:8
1:4	Reaktif	Atau
1:8	Reaktif	Reaktif pada pengenceran
1:16	Non reaktif	8 kali
1:32	Non reaktif

3.      Pemeriksaan TPHA (Treponema Pallidum Hemaglutination Assay)

a)       Metode : indirek hemaglutinasi

b)      Prinsip

Antibodi spesifik untuk T.pallidum yang ada di dalam serum pasien akan beraglutinasi dengan awetan eritrosit burung yang terdapat dalam reageant Plasmatec TPHA yang telah dilapisi komponen antigenik patogen T.pallidum (Nichol Strain)  dan menunjukkan pola aglutinasi pada sumur mikrotitrasi.

c)      Dasar Teori

Treponema Pallidum Hemagglutination Assay (TPHA) merupakan suatu pemeriksaan serologi untuk sifilis dan kurang sensitif bila digunakan sebagai skrining (tahap awal atau primer) sifilis. Manfaat pemeriksaan TPHA sebagai pemeriksaan konfirmasi untuk penyakit sifilis dan mendeteksi respon serologis spesifik untuk Treponema pallidum pada tahap lanjut atau akhir sifilis. Untuk skirining penyakit sifilis biasanya menggunakan pemeriksaan VDRL atau RPR apabila hasil reaktif kemudian dilanjutkan dengan pemeriksaan TPHA sebagai konfirmasi (Vanilla, 2011).

TPHA merupakan tes yang sangat spesifik untuk melihat apakah adanya antibodi terhadap treponema. Jika di dalam tubuh terdapat bakteri ini, maka hasil tes positif. Tes ini akan menjadi negatif setelah 6 - 24 bulan setelah pengobatan. Bakteri-bakteri yang lain selain keluarga treponema tidak dapat membuat hasil tes ini menjadi positif (Anonim, 2013).

Pemeriksaan TPHA dilakukan berdasarkan adanya antibodi Treponema Palidum yang akan bereaksi dengan antigen treponema yang menempel pada eritrosit sehingga terbentuk aglutinasi dari eritrosit-eritrosit tersebut (Vanilla, 2011).

Keunggulan metode TPHA untuk pemeriksaan Sifilis dibandingkan metode lain:

1.      Teknik dan pembacaan hasilnya mudah, cukup spesifik dan sensitive (dapat mendeteksi titer – titer yang sangat rendah)

2.      Bakteri lain selain dari family Treponema tidak dapat memberikan hasil positif

Namun, metode TPHA memiliki beberapa kekurangan, antara lain:

1.       Harganya mahal

2.       Pengerjaannya membutuhkan waktu inkubasi yang lama, hampir 1 jam. 

Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam pemeriksaan TPHA antara lain :

1.      Jangan menggunakan serum yang hemolisis karena dapat mempengaruhi hasil pemeriksaan.

2.      Serum atau plasma harus bebas dari sel darah dan kontaminasi mikrobiologi

3.      Jika terdapat penundaan pemeriksaan, serum disimpan pada suhu 2-8⁰C dimana dapat bertahan selama 7 hari dan bila disimpan pada suhu -20⁰C, serum dapat bertahan lebih lama.

4.      Serum atau plasma yang beku sebelum dilakukan pemeriksaan harus dicairkan dan dihomogenkan dengan baik sebelum pemeriksaan.

5.      Reagen harus disimpan pada suhu 2-8⁰C jika tidak digunakan dan jangan disimpan di freezer.

6.      Uji TPHA menunjukkan hasil reaktif setelah 1-4 minggu setelah terbentuknya chancre.

7.      Dalam melakukan pemeriksaan harus menyertakan kontrol positif dan kontrol negatif

d)     Alat, Bahan, dan Reagen

Alat

1.      Mikropipet 190 µl, 10 µl, 25 µl, dan 75 µl

2.      Microplate

3.      Yellow tip

 Bahan

1.      Serum

 Reagen

1.      Plasmatec TPHA Test Kit mengandung:

-          R1    : Test sel

-          R2    : Control sel

-          R3    : Diluent

-          R4    : Control positif

-          R5    : Control negatif

e)      Langkah Kerja

 Uji Kualitatif

1.       Alat dan bahan disiapkan

2.       Setiap komponen kit dan sampel dikondisikan pada suhu kamar.

3.       Semua reagen dihomogenkan perlahan

4.       Diluents ditambahkan sebanyak 190 µl dan sampel ditambahkan sebanyak 10µl  pada sumur 1 lalu dihomogenkan

5.       Campuran pada sumur 1 dipipet sebanyak 25 µl dan ditambahkan pada sumur 2 dan 3

6.       Control sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur 2 lalu dihomogenkan

7.       Test sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur 3 lalu dihomogenkan

8.       Sumur diinkubasi pada suhu ruang selama 45 – 60 menit.

9.       Aglutinasi yang terjadi diamati

10.   Sampel yang menunjukan hasil aglutinasi positif dilanjutkan ke uji semi kuantitatif.

11.   Note : control positif dan negatif selalu disertakan dalam setiap uji tanpa perlu diencerkan.

Uji Semi Kuantitatif

3.       Alat dan bahan disiapkan

4.       Setiap komponen kit dan sampel dikondisikan pada suhu kamar

5.       Semua reagen dihomogenkan perlahan

6.       Sumur mikrotitrasi disiapkan dan diberi label no. 1 sampai 8

7.       Pengenceran sampel dibuat pada sumur yang berbeda dengan sumur mikrotitrasi dengan mencampur 190 µl diluents dan 10 µl sampel

8.       Sumur mikrotitrasi no. 1 dikosongkan

9.       Sumur mikrotitrasi no. 2 – 8 ditambahkan 25µl diluent

10.   Pada sumur mikrotitrasi no. 1 dan 2 ditambahkan 25 µl sampel yang telah diencerkan.

11.   Campuran pada sumur 2 dipipet 25 µl dan ditambahkan pada sumur 3, lalu dihomogenkan. Begitu seterusnya sampai sumur 8

12.   Campuran pada sumur 8 dipipet 25 µl dan dibuang

13.   Control sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur mikrotitrasi no. 1 lalu dihomogenkan

14.   Tes sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur mikrotitrasi no. 2-8 lalu dihomogenkan

15.   Sumur diinkubasi pada suhu ruang selama 45 – 60 menit

16.   Aglutinasi yang terjadi dibaca, dan ditentukan titernya

f)       Interprestasi Hasil

 Uji Kualitatif

Hemaglutinasi positif ditandai dengan adanya bulatan berwarna merah dipermukaan sumur, hasil negatif terlihat seperti titik berwarna merah di tengah dasar sumur

Tingkatan aglutinasi:

+4   : bulatan merah merata pada seluruh permukaan sumur

+3   : bulatan merah terdapat di sebagian besar permukaan sumur

+2   : bulatan merah yang terbentuk tidak besar dan tampak seperti cincin

+1   : bulatan merah kecil dan tampak cincin terang

+/-   : tampak cincin dengan warna bulatan merah yang samar

-      : Tampak titik berwarna merah didasar sumur

Uji Semi Kuantitatif

Titer       : pengenceran tertinggi yang masih menunjukkan aglutinasi

Sumur	1	2	3	4	5	6	7	8
Titer	(control cell)	1:80	1:160	1:320	1:640	1:1280	1: 2560	1: 5120

4.      Pemeriksaan HIV

a). Metode :Imunokromatografi (Rapid Test)

Tujuan : Mendeteksi keberadaan virus HIV atau antibod HIV dalam sampel Serum.

 Prinsip :

Specimen yang di teteskan pada ruang membrane  

bereaksi dengan partikel yang telah dilapisi dengan protein A yang terdapat pada bantalan specimen. Selanjutnya akan brgerak secara kromatografi dan bereaksi dengan antigen HIV rekombinan yang terdapat pada garis test. Jika specimen mengandung antibody HIV maka akan timbul garis warna.

Dasar Teori

HIV adalah suatu virus yang dapat menyebabkan

penyakit AIDS. Virus ini menyerang manusia dan menyerang sistem kekebalan (imunitas) tubuh, sehingga tubuh menjadi lemah dalam melawan infeksi. Seperti virus lain pada umumnya, HIV hanya dapat bereplikasi dengan memanfaatkan sel inang. Siklus hidup HIV diawali dengan penempelan partikel virus (virion) dengan reseptor pada permukaan sel inang, di antaranya adalah CD4, CXCR5, dan CXCR5. Sel-sel yang menjadi target HIV adalah sel dendritik, sel T, dan makrofaga. Sel-sel tersebut terdapat pada permukaan lapisan kulit dalam (mukosa) penis, vagina, dan oral yang biasanya menjadi tempat awal infeksi HIV.  Selain itu, HIV juga dapat langsung masuk ke aliran darah dan masuk serta bereplikasi di noda limpa.

Alat dan Bahan:

 Alat           :

- Strip HIV/Test card HIV

- Pipet tetes

Tabung reaksi kecil + rak 

 Bahan       :

- Sampel serum

- Sampel dilution buffer

Cara Kerja                         :

1.      Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.

2.      Dimasukkan 3 tetes serum pada sumur sampel.

3.      Ditambahkan 1 tetes larutan buffer.

4.      Didiamkan selama beberapa menit.

5.      Dibaca reaksi yang terjadi.

b). Pemeriksaan ELISA

Mekanisme :

·         Virus HIV ditumbuhkan pada biakan sel

·         Dirusak dan dilekatkan pada biji-bijin polistiren atau sumur microplate

·         Inkubasi serum atau plasma yang akan diperiksa dengan antigen tersebut selama 30 menit sampai 2 jam, lalu cuci

·         Bila positif IgG(immunoglobulin G) yg menempel pada biji2 / sumur microplate, maka akan terjadi reaksi pengikatan antigen-antibodi ; antibodi anti-IgG sudah diberi label dengan enzim alkali fosfatase, horseradish peroxidase

·         Akan berwarna bila ditambah dengan suatu substrat

·         Ada yang lebih spesifik, yaitu test EIA dengan ikatan dari heavy & light chain dari Human Immunoglobulin à mampu mendeteksi IgM dan IgG

·         Umumnya hasil akan positif pada fase dimana timbul gejala pertama AIDS (AIDS Phase) dan sebagian kecil akan negatif pada fase dini AIDS (Pre AIDS Phase)

Kelebihan test ELISA yaitu :

·         Nilai sensitivitas yang tinggi ; 98,1%-100 %

·         Meski demikian, perdictive value hasil test positif tergantung dari prevalensi HIV di masyarakat ; pada penderitaà100%, donor darah à5%-100%, hasil negatif pada masyarakat à99,99% sampai 76,9%

Kekurangan path test ELISA yg perlu diperhatikan :

·         Pemeriksaan ELISA hanya mendeteksi antibodi, bukan antigen (akhir-akhir ini sudah ditemukan test ELISA untuk antigen). Oleh karena itu test uji baru akan positif bila penderita telah mengalami serokonversi yang lamanya 2-­3 bulan sejak terinfeksi HIV, bahkan ada yang 5 bulan atau lebih (pada keadaan immunocompromised). Kasus dengan infeksi HIV laten dapat temp negatif selama 34 bulan.

·         Pemeriksaan ELISA hanya terhadap antigen jenis IgG. Penderita AIDS pada taraf permulaan hanya mengandung IgM, sehingga tidak akan terdeteksi. Perubahan dari IgM ke IgG membutuhkan waktu sampai 41 minggu.

·         Pada umumnya pemeriksaan ELISA ditujukan untuk HIV­1. Bila test ini digunakan pada penderita HIV-2, nilai positifnya hanya 24%. Tetapi HIV­2 paling banyak ditemukan hanya di Afrika.

·         Masalah false positive pada test ELISA. Hasil ini sering ditemukan pada keadaan positif lemah, jarang ditemukan pada positif kuat. Hal ini disebabkan karena morfologi HIV hasil biakan jaringan yang digunakan dalam test kemurniannya ber-beda dengan HIV di alam.

c). Pemeriksaan Western Blot

Pengertian :

Metode untuk deteksi protein pada sampel jaringan ,Imunoblot dg elektroforesis gel untuk memisahkan protein asli atau perubahan oleh jarak polipeptida atau oleh struktur 3D-protein,Protein dikirim ke membran à dideteksi dg antibody.Cukup sulit, mahal, interpretasinya butuh pengalaman dan lama pemeriksaan kurang lebih 24 jam

                        Mekanisme :

·         HIV murni letakan pada pada poliakrilamid gel yg diberi arus elektroforesis sehingga terurai menurut berat protein yang berbeda-beda

·         Pindahkan ke Nitrocellulosa dan inkubasi dg serum penderita

·         Antibodi HIV dideteksi dg memberikan antibodi anti-human yg sudah dikonjugasi dg enzim yg memberikan warna bila diberi suatu substrat

·         Test ini dilakukan bersama dengan suatu bahan dengan profil berat molekul standar, kontrol positif dan negatif

·         Gambaran band dari bermacam-macam protein envelope dan core dapat mengidentifikasi macam antigen HIV. Antibodi terhadap protein core HIV (gag) misalnya p24 dan protein precursor (p25) timbul pada stadium awal kemudian menurun pada saat penderita mengalami deteriorasi. Antibodi terhadap envelope (env) penghasil gen (gp160) dan precursor-nya (gp120) dan protein transmembran (gp4l) selalu ditemukan pada penderita AIDS pada stadium apa saja

·         Beberapa protein lainnya yang sering ditemukan adalah: p3 I, p51, p66, p14, p27, lebih jarang ditemukan p23, p15, p9, p7. Secara singkat dapat dikatakan bahwa bila serum mengan-dung antibodi HIV yang lengkap maka Western blot akan memberi gambaran profil berbagai macam band protein dari HIV antigen cetakannya

d). PCR (Polymerase Chain Reaction)

Meliputi 3 perlakuan:

¡  Denaturisasi

¡  Hibridisasi

“Primer" sekuen DNA pada bagian tertentu.

¡  Perbanyakan bagian

Oleh Tag polymerase, dengan mengadakan campuran reaksi dalam tabung mikro yang kemudian diletakkan pada blok pemanas yang telah diprogram pada seri temperatur yang diinginkan.

Dasarnya:

¡  Target DNA diekstraksi dari spesimen

¡  Membelah dalam tabung sampai diperoleh jumlah cukup (kelipatan jutaan atau lebih)

¡  Deteksi dengan cara hibridisasi.

¡  Target didenaturisasi pada suhu 90°–95°C àDidinginkan antara 37°–50°C à annealing spesifik antara primer dan target DNA à cetakan untuk enzim Tag-polymerase (pada suhu 67°–72°C mengkopi masing-masing rantai)

¡  Setiap produk terdiri dari sekuen yang saling melengkapi 1 dari 2 primer dan akan menguatkan dalam lingkaran sintesis.

Hambatan diagnosis PCR: false negative.

¡  Dihindarkan dengan: memilih primer dari bagian yang berlawanan dari genome.

¡  Primer SK 38/39 dan SK 68/69: pilihan yang baik digunakan untuk HIV.

¡  Pasangan primer SK-38–39 dan atau SK-145–101 telah berhasil digunakan untuk mendeteksi HIV pada lebih dari 96% individu dengan zat anti positif.

¡  PCR dapat mendeteksi molekul tunggal dari target DNA dan juga mengamplifikasi target yang ada sebagai pasangan yang tidak komplet; sebaliknya kontaminasi dan campuran reaksi dengan sejumlah target DNA yang tidak terdeteksi akan memberikan hasil false positive. Ketaatan mengikuti prosedur dapat mengurangi risiko kontaminasi. Cara yang cepat dan sederhana dalam menyiapkan sampel dapat pula mengurangi false positive.

PCR DNA dan RNA HIV

¡  PCR DNA HIV

·         Ketersediaan primer untuk subtipe HIV memungkinkan para peneliti untuk memakai PCR DNA HIV untuk meneliti dan melacak subtipe HIV untuk pengembangan vaksin dan penelitian epidemiologi.

·         PCR DNA HIV pertama kali dipakai untuk mendiagnosis HIV pada bayi pada 1990. Tes sel mononuklear darah perifer (peripheral blood mononuclear cells/ PBMC) dari bayi pada berbagai titik waktu setelah kelahiran.

·         Penelitian selanjutnya terhadap bayi yang baru lahir oleh Delamare dkk34 dan Dunn dkk35 menemukan bahwa PCR DNA HIV terdeteksi <50% infeksi HIV dalam lima hari pertama kehidupannya. Sensitivitasnya meningkat hingga 90% setelah berusia 14 hari.

·         Ketidaksensitifan PCR DNA HIV untuk mendiagnosis infeksi HIV saat kelahiran mungkin terjadi karena kenyataan bahwa kebanyakan penularan HIV pada bayi terjadi saat sakit kelahiran dan persalinan, dan virus tidak mencapai tingkat terdeteksi selama beberapa minggu setelah tertular. Bayi yang terinfeksi dalam kandungan mungkin mempunyai hanya sedikit jumlah virus yang bereplikasi.

PCR RNA HIV

·         Metode yang dapat mendiagnosis bayi lebih dini, dapat mendeteksi HIV dalam darah.

·         Berbeda dengan PCR DNA HIV (tes kualitatif: tes memberikan diagnosis HIV ya/tidak), deteksi RNA HIV menyediakan informasi tambahan:

ž  informasi kuantitatif tentang status virologis

ž  Menghitung jumlah virus yang beredar ( “viral load” dalam copies/mL) pada pasien.

·         Viral load dapat dipakai untuk:

ž  mendiagnosis pasien

ž  menuntun permulaan memakai ART

ž  memantau tanggapan pengobatan

·         Diharapkan RNA HIV:

ž  akan sensitif dalam mendeteksi virus dan tetap sangat spesifik terhadap HIV

ž  akan mengganti teknik biakan virus yang lebih rumit dan mahal untuk mendiagnosis bayi.

Daftar Pustaka

 Hardjono dkk, 2003 .interpretasi hasil test lab diagnosik. Makassar  LEPHAS.Makassar, 26 april 2012.